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  甜菊安全性评估  

[甜菊安全性评估]甜菊糖苷
该书有关甜菊糖苷的规格是在2008年召开的JECFA 第69届会议上制定的,在FAO JECFA出版的第5本专著(2008) 中发表,用于替代2007年召开的JECFA 第68届会议上制定, 并在FAO JECFA出版的第5本专著(2007) 中发表的甜菊糖苷的摄入规格。在2008年召开的JECFA 第69届会议上,确定了每日允许摄入量为0-4 mg/kg体重 (以甜菊醇表示)。
 
同一词:INS No.960
定义:  甜菊糖苷是从甜叶菊(Stevia rebaudiana)的叶子提取的。甜叶菊叶子经热水提取后,含水提取物经吸附树脂过滤,以收集和浓缩甜菊糖苷成分。树脂用溶剂乙醇洗脱,以释放甜菊糖苷,产品在甲醇或者含水酒精中再结晶。可以采用离子交换树脂方法对产品进行醇化。终产品可以喷雾干燥。
 
        甜菊甙和莱包迪苷A是甜菊糖苷的主要成分,与他们的甜味特征有关的糖苷还包括莱包迪苷C, ducoside A, rubusoside, steviolbioside, rebaodioside B (莱包迪苷B)。甜菊糖苷中这几种成分的含量通常低于甜菊甙和莱包迪苷A。
化学名称:甜菊甙 13-[(2-O-β–D-glucopyranosyl-β–D-glucopyranosyl)oxy] kaur-16-en-18-oic acid, β-D-glucopyranosyl ester
莱包迪苷A (Rebaudioside A): 13-[(2-O-β –D-glucopyranosyl-
3-O-β–D-glucopyranosyl-βD-glucopyranosyl)oxy] kaur-6-en-8-oic acid, β-D-glucopyranosyl ester
C.A.S.登录号:甜菊甙:57817-89-7
             莱包迪苷A:58543-16-1
化学式:  甜菊甙:C38H60O18
               莱包迪苷A:C44H70O23
结构式:   甜菊糖苷7种成分命名:
           
化合物名称             R1            R2
甜菊甙                β-Glc        β-Glc-β-Glc(2-1)
莱包迪苷A            β-Glc         β-Glc-β-Glc(2-1)
                                     β-Glc(3-1)
莱包迪苷C            β-Glc         β-Glc-α-Rha(2-1)
卫矛醇甙A (杜克甙)    β-Glc         β-Glc-α-Rha(2-1)
甜茶素                β-Glc          β-Glc
甜菊糖甙              H              β-Glc-β-Glc(2-1)
莱包迪苷B            H              β-Glc-β-Glc(2-1)
                                       β-Glc(3-1)
 
:甜菊醇(R1=R2=H)是甜菊糖甙的糖甙配基。Glc和Rha 分别表示葡萄糖和鼠李糖。
 
分子量:甜菊甙 :804.88
        莱包迪苷A: 967.03
检测:  干重基础上不不少于上述7种成分总和的95%。
描述:  白色或浅黄色粉末,无味或者具有轻微特有的味道。比蔗糖甜200-300倍。
主要用途:用作甜味剂。
 
坚定
溶解性:  能溶于水
甜菊甙和莱包迪苷A: 检测中通过下述步骤得到的层析谱的主峰符合甜菊甙和莱包迪苷A。
pH:      4.5-7.0之间 (1/100的溶液)。
 
纯度
总灰分(卷4):  不超过1%。
干燥失重(卷4):低于6% (105℃, 2h)
残留溶剂(卷4):甲醇不超过200 mg/kg, 乙醇不超过5000 mg/kg。
                (方法1:卷4,一般方法,有机物组分,残留溶剂)。
砷(卷4):      低于1 mg/kg。
              用原子吸收法测定(用方法II制备检测溶液)。
铅(卷4):      低于1 mg/kg。
用AAS/ICP-AES 技术测定。样品大小的选择以及制备样品的方法可根据第4卷介绍的方法(在“一般方法,金属杂质中”)。
 
检测方法: 用高压液相色谱方法测定甜菊糖甙的各种成分百分比(卷4)。
           标准
           甜菊甙纯度>99.0%,莱包迪苷A的纯度>97%(从日本Wako化学工业公司可买到)。
           流动相
           HPLC-级乙腈和水的混合液(80:20)。用磷酸(85%的试剂级别)调整pH到3.0。用微孔为0.22 μm的过滤器或相当的过滤器过滤。
           标准溶液
(a)    准确称取50mg干燥(105℃, 2h) 标准的甜菊甙加入100ml的量瓶。稀释到流动相容量。
(b)   用前面干燥的莱包迪苷A重复这一过程。
样品溶液
准确称取60-120mg干燥(105℃, 2h) 样品加入100ml的量瓶。稀释到流动相容量。
色谱条件
色谱柱:Supelcosil LC-NH2硅胶柱或者相当的柱(长度:15-30 cm;内径:3.9-4.6 mm)。
流动相:比例为80:20的乙腈和水的混合液(见前面)。
流速:调整到莱包迪苷A的保留时间为大约21分钟。
注射体积:5-10 μl。
检测器:UV在210 nm处。
柱温度:40℃
程序
通过将流动相液体泵入仪器进行平衡直到无漂移基线出现为止。记录样品溶液和标准液的层析谱。
相对于莱包迪苷A (1.00) 的保留时间是:
  甜菊甙为0.45-0.48, 甜茶素为0.12-0.16
  卫矛醇甙A为0.25-0.30, 甜菊醇B甙为0.35-0.41
  莱包迪苷C 为0.63-0.69,莱包迪苷B为0.73-0.79
 
测定样品溶液中7种甜菊糖苷的峰面积(次要成分可能无法检测到)。
测定标准液中甜菊甙的峰面积。
 
用下述公式计算7种甜菊糖苷中每一种的百分比X:
      X%=[Ws/W] × [fxAx/As] ×100
式中:
Ws是标准液中甜菊甙的量(mg)
W是样品溶液中样品的数量(mg)
As是标准液中甜菊甙的峰面积
Fx是每一种甜菊糖苷X的分子量与甜菊糖苷分子量之比:1.00 (甜菊甙), 0.98 (卫矛醇甙A (杜克甙)), 1.20 (莱包迪苷A), 1.18 (莱包迪苷C), 0.80 (甜茶素), 0.80 (甜菊醇B甙), 1.00 (莱包迪苷B)。
          
           计算甜菊糖苷总量的百分比(将7种成分的百分比相加)。(中国甜菊协会组织翻译)

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